طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی‌تنسیس سویه Rev1 جهش‌یافته برای تولید سویه کاندید واکسن

زمینه و اهداف: بروسلوز از مهم‌ترین بیماری‌های مشترک انسان و دام محسوب می‌گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب می­باشد. واکسن­های موجود از قبیل واکسن Rev1 با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری می­ باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی­بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش­یافته برای تولید سویه کاندید واکسن بود. مواد و روش کار: در این مطالعه برای حذف ترادف هدف، تصمیم به استفاده از پلاسمید pDS132 به عنوان وکتور خودکشی گرفته شد. بمنظور ساخت کاست حذف، پس از طراحی و سنتز جداگانه قطعات دارای همولوژی با ترادف­های هدف، این قطعات جهت ساخت قطعه واحد، با استفاده از آنزیم­های محدودگر مناسب در وکتور pBluescriptSK(-) کلون شد. سپس به منظور ساخت وکتور خودکشی، قطعه کاست حذف با استفاده از آنزیم­ های محدودگر مناسب از وکتور فوق جدا و در وکتور pDS132 ساب کلون شد. یافته‌ها: وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR با در برداشتن 590 جفت باز از توالی بالادست و 421 جفت باز از توالی پایین­دست ترادف هدف می­تواند به عنوان یک ناقل خودکشی اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن kanR در ژنوم باکتریبروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش ­یافته موجب حذف مقاومتآنتی­ بیوتیکی در آن بشود. نتیجه‌گیری: استفاده از سیستم خودکشی مورد نظر با استفاده از وکتور pDS132-ΔkanR، ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش­ های خودکشی وابسته به مارکر مثبت و نیز روش‌های ابتدایی مانند پاساژ متوالی، روش موثرتری می­باشد.